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第281章 变异感染者DNA提取(2 / 2)

~undefed 若需得到rna-free 的基因组dna,在步骤3 加入buffer bl 前加入dnase-free 的rnase a(20 g/ l) 。

3 加200 ul buffer bl ,注意不要打湿每孔的边缘,用96 圆孔硅胶片密封各孔。

4 用力混合30 s。

5 3000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机,当速度达到3000rp后即停止。

6 在培养箱或烘箱中70c温浴至少10 。

7 3 000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机,当速度达到3 000rp后即停止。

8 取下96 圆孔硅胶片,每孔加入200 ul 乙醇(96-100)。

9 用96 圆孔硅胶片密封各孔,用力混匀混合15 s。3 000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机,当速度达到3 000 rp 后即停止。

10 将96 孔dna 板放到一洁净的96 孔16 l 深孔板。取下圆孔板上的96 圆孔硅胶片,将每孔中的溶液转移至96 孔dna 板 中,6 000 rp 离心4 。

11 丢弃96 孔16 l 深孔板的滤液,将96 孔dna 板放回到96 孔16 l 深孔板上,每孔加入500 ul buffer w1b,用一新的bf-400 膜密封96 孔dna 板,6 000 rp 离心4 。

~undefed 确认在buffer w1b ncentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

12 丢弃96 孔16 l 深孔板的滤液,将96 孔dna 板放回到96 孔16 l 深孔板上,每孔加入850 ul buffer w2,用另一新 的bf-400膜密封96孔dna板,6 000 rp 离心4 。

~undefed 确认在buffer w2 ncentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

13 弃滤液,将96孔dna板放回到96孔16 l 深孔板上,每孔加入400 ul buffer w2, 用另一新的bf-400 膜密封96 孔dna 板,6 000 rp 离心4 。

14 将96孔dna板放在一洁净的96 孔16 l 深孔板上,用bf-400膜密封96孔dna板,6 000 rp离心15 。

15 将96孔dna板放在另一洁净的96 孔16 l 深孔板上,每孔加入100-200 ul eent b 或去离子水,室温静置2 ,用另一新的bf-400膜密封96 孔dna板,6 000 rp 离心4洗脱得到dna。

看着最终提取出来的dna样本,钟教授终于露出了满意的微笑

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