~undefed 若需得到rna-free 的基因组dna,在步骤3 加入buffer bl 前加入dnase-free 的rnase a(20 g/ l) 。
3 加200 ul buffer bl ,注意不要打湿每孔的边缘,用96 圆孔硅胶片密封各孔。
4 用力混合30 s。
5 3000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机,当速度达到3000rp后即停止。
6 在培养箱或烘箱中70c温浴至少10 。
7 3 000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机,当速度达到3 000rp后即停止。
8 取下96 圆孔硅胶片,每孔加入200 ul 乙醇(96-100)。
9 用96 圆孔硅胶片密封各孔,用力混匀混合15 s。3 000 rp 简短离心使96 圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机,当速度达到3 000 rp 后即停止。
10 将96 孔dna 板放到一洁净的96 孔16 l 深孔板。取下圆孔板上的96 圆孔硅胶片,将每孔中的溶液转移至96 孔dna 板 中,6 000 rp 离心4 。
11 丢弃96 孔16 l 深孔板的滤液,将96 孔dna 板放回到96 孔16 l 深孔板上,每孔加入500 ul buffer w1b,用一新的bf-400 膜密封96 孔dna 板,6 000 rp 离心4 。
~undefed 确认在buffer w1b ncentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
12 丢弃96 孔16 l 深孔板的滤液,将96 孔dna 板放回到96 孔16 l 深孔板上,每孔加入850 ul buffer w2,用另一新 的bf-400膜密封96孔dna板,6 000 rp 离心4 。
~undefed 确认在buffer w2 ncentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
13 弃滤液,将96孔dna板放回到96孔16 l 深孔板上,每孔加入400 ul buffer w2, 用另一新的bf-400 膜密封96 孔dna 板,6 000 rp 离心4 。
14 将96孔dna板放在一洁净的96 孔16 l 深孔板上,用bf-400膜密封96孔dna板,6 000 rp离心15 。
15 将96孔dna板放在另一洁净的96 孔16 l 深孔板上,每孔加入100-200 ul eent b 或去离子水,室温静置2 ,用另一新的bf-400膜密封96 孔dna板,6 000 rp 离心4洗脱得到dna。
看着最终提取出来的dna样本,钟教授终于露出了满意的微笑